人正常结肠上皮细胞(NCM460)培养要点

该细胞来源于西班牙裔，来自胃癌患者的正常结肠；粘膜组织。倍增时间：32-38小时（INCELL），自发性永生化细胞系。

该株细胞DNA分型在细胞系检索中没有找到匹配的细胞系。本次检测在该细胞系中没有发现多等位基因。该细胞系为单一来源人源细胞，未发现交叉污染，因数据库未收录细胞系NCM460 相关STR数据信息，显示无匹配结果，该样本与NCM460对照细胞系STR基因型完全匹配。

细胞名称：人正常结肠上皮细胞(提供STR鉴定报告)

细胞简称：NCM460

产品货号：TCH-C450

种属来源：人

组织来源：结肠

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培养体系：RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

配套培养基货号：TCH-G450

传代比例：1:2-1:6，每2-3天换液一次

传代周期：24-36 h

培养条件：气相：95%空气+5%CO2，温度：37℃

冻存条件：60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO，液氮储存

质量检测：细菌、真菌、支原体检测均为阴性

NCM460细胞培养注意事项

1. 部分细胞在传代后时，会有以下现象：

细胞内会有黑色小点、细胞间隙有些颗粒物、培养基漂浮一些死细胞。以上都是细胞培养常见现象，不影响细胞增殖和实验。

细胞内的黑色颗粒是细胞外分泌泡、细胞器折光或者细胞膜表面物质，这个属于细胞自身特性，无法清除也无法改变，具体情况可以参考 ATCC、DSMZ 等大型细胞库细胞照片。

细胞外的黑色颗粒大部分是细胞碎片，可以吸走培养基后用 PBS( E2119)润洗；润洗不能清除的可以消化细胞重新接种，消化完成后加完全培养基终止消化，混匀细胞，收集细胞悬液 900-1000rpm(约 150g)离心 3min，弃上清。再加 5ml PBS 重悬细胞，再离心后，用完全培养基重悬接种到新的培养皿。第二次 PBS重悬是为了去除碎片，如果平时碎片比较少，传代时可以省略 PBS重悬的步骤；如果碎片很多，建议 PBS多洗几次。

2. 细胞对于消化比较敏感，消化过度会严重影响细胞状态，导致细胞传代死亡漂浮或者传代后不长。不同品牌胰酶溶液成分不一样，消化活性差别比较大，更换胰酶品牌时需重新摸索消化时间，以消化到细胞间隙变大但未漂浮为准，此时结束消化最佳，避免消化过度导致细胞死亡。细胞消化后比较脆弱，吹打力度不要过大，不要产生过多气泡，否则会严重影响细胞状态。

3. 不同细胞生长速度差异较大，所有细胞收货后首次传代建议按 1:2 传代。正常培养时生长较慢、密度较低的细胞需要传代时按 1:2 传代，生长较快、密度较高的细胞可以按 1:4 传代。

4. 细胞生长偏慢时，可以提高 5-10%血清浓度（血清总浓度不超过20%）培养一段时间，待细胞状态和生长速度恢复正常后换回正常血清浓度

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