一、AAV、LV和ADV的区别:
AAV(腺相关病毒):是一种单链DNA病毒,常用于基因治疗和基因传递。AAV具有较低的免疫原性,能够长期稳定地表达外源基因,但其包装容量有限,约为4.7kb。
LV(慢病毒):是一种基于HIV的逆转录病毒,能够将基因整合到宿主基因组中,实现长期稳定表达。LV的包装容量较大,可达8-10kb,但具有较高的免疫原性和潜在的插入突变风险。
ADV(腺病毒):是一种双链DNA病毒,具有较高的感染效率,但其表达周期较短,容易引发免疫反应。ADV的包装容量较大,可达30-35kb,但不易实现长期稳定表达。
二、实现AAV在动物体内表达需要注意的关键点:
确保病毒滴度:高滴度的AAV病毒有利于提高转导效率。
选择合适的血清型:不同血清型的AAV对组织或细胞的亲和力不同,选择合适的血清型可以提高转导效率。
优化注射方案:包括注射剂量、注射部位和注射方式等。
避免免疫反应:通过预处理或选择免疫原性较低的血清型来降低免疫反应。
确保外源基因的表达调控元件正确:如启动子、增强子等。
三、AAV注射小鼠的病毒量:
AAV注射小鼠的病毒量取决于多种因素,如病毒血清型、注射部位、目标组织等。通常,小鼠体内实验的注射剂量范围为1×10^10至1×10^12病毒基因组单位(vg)/小鼠。具体剂量需根据实验目的和预实验结果进行调整。
四、AAV感染后过表达效果弱的原因:
病毒滴度不足:病毒量不足以实现高效转导。
目的基因表达调控元件不合适:启动子活性低或与目标组织不匹配。
免疫反应:免疫反应可能导致病毒被清除,影响表达效果。
病毒分布不均:注射方式可能导致病毒在目标组织分布不均,影响表达效果。
五、AAV的注射方式选择:
尾静脉注射:适用于全身性分布,如肝脏、心脏等组织。优点是操作简便,缺点是可能存在病毒分布不均的问题。
局部原位注射:适用于局部组织或器官,如大脑、肌肉等。优点是病毒分布更精准,表达效果较好;缺点是操作相对复杂,可能对组织造成损伤。
根据实验目的和目标组织选择合适的注射方式。如果需要全身性分布,可以选择尾静脉注射;如果需要局部表达,可以选择局部原位注射。