CRISPR/Cas9应用—细胞基因敲入（knock in）

基因敲入技术原理

CRISPR-Cas9基因敲入系统是Cas9内切酶切割双链DNA，且有一段高度同源的DNA修复模板存在的情况下，生物体内启动HDR修复路径，将一段外源DNA定点插入基因内部。

同源性定向修复（HDR）途径，对比NHEJ修复途径，同源性定向修复（HDR）途径是更为精确的修复机制。这种修复机制主要用于CRISPR Cas9系统介导的基因敲入。在该修复路径中，需要将一段与预期编辑位点上下游紧邻序列具有高度同源性的DNA修复模板、特异的gRNA和Cas9核酸酶一起引入细胞中。

在高度同源性DNA模板存在的情况下， HDR机制可以通过同源重组将一段DNA插入编辑位点（图4）。这种修复方式可以将一段DNA序列精准地插入特定的基因组位点。

技术原理图

基因敲入服务流程

· 细胞检测

微生物、增殖能力、克隆形成能力、gRNA位点

· 敲除载体构建和Donor载体构建

非病毒体系、gRNA载体、Donor载体

· 细胞电转，基因突变Cell pool构建

电转参数优化、Cell pool编辑效率检测（部分项目）

· ClonePlus 细胞单克隆筛选

ClonePlus单克隆技术、高通量阳性克隆筛选

· ClonePlus基因定点敲入

单克隆（12-18周）

稳定敲入

长期研究（传代-扩增）

细胞基因定点敲入案例

HEK293细胞基因定点敲入

突变基因：FOXG1基因；KI片段大小：2.5 Kb

Cas9-Cell line Knock-In service（Cas9-CKI）基因定点敲入细胞系是Cas9X技术团队针对实验室常用的各种细胞系，研究并确立针对不同的细胞的外源基因或者片段高效敲入（Knock-in, KI）的技术操作规程，主要目的就是：解决KI效率低下和KI片段长度限制的问题。

海星生物一站式解决细胞基因功能研究纯合/杂合敲入细胞系。超过千个成功敲入KI案例。

以上内容由海星生物（

http://www.hycyte.com)提供

我们的服务：CRISPR/Cas9细胞基因编辑、载体构建/病毒包装、分子诊断标准品/突变基因标准品/融合基因标准品、细胞稳转 / 细胞干扰

我们的产品：HyCyte 干细胞/原代细胞/细胞株、三系诱导培养试剂、ClonePlus 专用培养基、基因编辑试盒、病毒现货、细胞专用血清

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cas9x细胞基因编辑

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