3T3-L1细胞成脂诱导注意要点

3T3-L1是从3T3细胞（Swissalbino）中经克隆分离得到的连续传代的亚系。该细胞从快速分裂到汇合和接触性抑制状态经历了前脂肪细胞到脂肪样细胞的转变。该细胞鼠痘病毒阴性；可产生甘油三酯，高浓度血清可增强细胞内脂肪堆积。

3T3-L1细胞成脂诱导12d-油红染色后

3T3-L1成脂诱导—铺板注意要点

1. 3T3-L1诱导过程中贴壁能力下降，细胞易脱壁，建议在铺板前使用0.1%明胶包被，可有效改善细胞贴壁能力。

2. 3T3-L1起始密度不宜过低，一般为90%-100%，过低的铺板密度会导致脂滴较少。

3. 使用对数生长期的细胞进行诱导，一般复苏后建议至少传代1次再进行铺板。

3T3-L1诱导前起始密度

3T3-L1成脂诱导—换液注意要点

1. 3T3-L1诱导过程换液需要轻柔，建议沿着培养器皿侧壁轻柔滴加诱导液，防止细胞脱壁；

2.细胞预冷容易皱缩，也会增加脱壁的风险，每次换液前培养基应当充分预热；

3.诱导液配制后应尽快使用，一般不超过3个月。

3T3-L1诱导4d

3T3-L1诱导7d

3T3-L1诱导11d

3T3-L1成脂诱导—染色注意要点

1. 当观察到脂滴时，便可以进行油红O染色，如脂滴较小，可以延长诱导时间2-3d。诱导时间过长会导致脂滴脱落到培养基中，随着换液损失脂滴，所以成脂诱导的染色时间点应以镜下观察为准，并不是诱导时间越长越好。

2. 油红O染色液时过饱和溶液，使用1×PBS稀释后应该沉淀或离心处理，染色时取上层析出物较少的染色液进行染色。

3. 油红O染色后如需拍照需尽快完成，放置时间过久会导致脂滴脱壁或融合，影响拍照效果。

3T3-L1诱导11d油红O染色

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