专门写给没有排枪用,但会经常用单枪种96孔板的实验室大怨种~
1⃣️、计数后,吸取适量体积的细胞悬液到培养基中稀释,这一步要注意的细节很多,比如吸取前一定要把细胞悬液吹匀,稀释后拿量程大的移液枪多吹吸几次(10次左右),但要避免起太多泡
2⃣️、(划重点‼️)种第一个孔时,移液枪按到第二档吸液,第一档吹出,之后到每个孔无论吹吸都只按到第一档,使枪头前段始终保留一段液体,这样做可以避免吸液时枪头内有气泡体积不准,并减少液体在枪头壁吸附残留所致的误差。
3⃣️、种板使枪头抵着同一个方向均匀缓慢打出液体,个人习惯把枪头抵在每个孔的九点钟方向,让枪头前段抵在壁和孔底中间的直角部分。
4⃣️、种板时很容易神游,千万记住每铺完一排,就要再次混匀一下细胞稀释液,有些细胞的沉降速度很快,稍不注意就不均匀了。
5⃣️、铺完后记得最外面一圈➕pbs(或者在铺板之前加),上述方法铺完后孔内是很均匀的体系,可以不用再手动摇板。一般会再1000转离心1min,加速细胞沉降,然后再显微镜下观察密度、分布等情况。