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什么是Treg细胞？
Treg（调节性T细胞，Regulatory T cells）是免疫系统的重要调节细胞，对维持自身耐受性和免疫细胞稳态至关重要，它由胸腺产生后输出至外周，并通过主动调节的方式抑制存在于正常机体内潜在的自身反应性T细胞的活化与增殖，从而调节机体的免疫力。目前，最常用的鉴别Treg的标志Marker是CD4、CD25、CD127和Foxp3。Treg在免疫耐受、自身免疫病、感染性疾病、器官移植及肿瘤等多种疾病中发挥重要的作用。
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Treg细胞分类及标志物
根据发育来源，Treg细胞可分两类：
◇一类是天然产生的自然Treg（nTreg），主要在胸腺里分化发育而来，主要包括CD4+Treg细胞。
◇另一类是经诱导产生的适应性Treg（iTreg），是由初始CD4+T细胞（Th0）经抗原刺激后分化发育而来，包括Tr1细胞、Th3细胞和CD8+Treg细胞等多种亚型，肿瘤微环境中的Treg主要就是指iTreg细胞。
图1：Treg细胞发育流程
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Treg细胞检测指标选择
要检测Treg细胞，应当如何选择指标呢？小E根据过往的实验经验，为大家进行了如下总结：
1.
CD3、CD4表达量较高。
2.
蓝色表示重要/表达较低的指标，需要搭配强荧光素。
3.
FOX和CD127只需选择一个即可，Foxp3为核内因子，检测时需要固定破膜（E-CK-A108）；CD127是细胞表面Marker，则不需要固定破膜。
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Treg细胞检测案例
小鼠脾脏Treg（3色）检测
Panel Design&样本管设置：
流式抗体信息：
图2.小鼠脾脏Treg（3色）检测结果
如上图所示，根据FSC/SSC圈出淋巴细胞群，去除粘连体之后，根据CD4+圈出CD4+T淋巴细胞群，最后通过CD25+Foxp3+确定Treg细胞群。
注意事项：
1.
小鼠Treg的标记是CD4+CD25+Foxp3+。
2.
CD4分群明显，无需同型对照，CD25和Foxp3分群不明显，需同型对照。
3.
荧光素间有溢漏，故需要设置单阳管用于调节补偿。
4.
破膜剂使用不当会造成很高的背景以及细胞分群不明显。
人外周血Treg（6色）检测
Panel Design&样本管设置：
图3.人外周血Treg（6色）检测结果
如上图所示，根据CD45+和SSC圈出淋巴细胞群，去除粘连体之后，根据CD3+圈出T淋巴细胞群，再根据CD4+CD8-圈出CD4+T淋巴细胞群，最后通过CD25+CD127-/low确定Treg细胞群。
注意事项：
1.
传统的通过检测Foxp3鉴定Treg的方法操作相对复杂，且固定破膜步骤对实验者要求较高，目前通常通过CD127来检测人Treg。
2.
增加CD45指标，便于淋巴细胞圈门，直接通过CD45和SSC圈出淋巴细胞门，分析CD4+CD25+CD127-/low的细胞比例，正常人外周血中Treg细胞在淋巴细胞中占比为3%~10%。
3.
需要设置单阳管用于调节补偿。
