目前制备感受态细胞常用的方法有RbCl (KCl)法、CaCl₂法、电击感受态法等。其中，RbCl (KCl)法制备的感受态细胞转化效率较高，但制备较复杂，不适合实验室用；CaCl₂法简便易行，且转化效率完全可以满足一般实验要求，使用广泛；电击感受态法制备的感受态细胞转化效率高，操作简单，需要电击仪进行后续的转化工作。因此实验室感受态制备常用的两种方法就是CaCl₂法和电击法。

1. 挑取宿主菌单菌落接种于3-5 mL LB液体培养基中，37℃下振荡培养12 h左右，直至对数生长后期。将该菌悬液以1:100-1:50的比例接种于100 mL LB液体培养基中，37 ℃振荡培养2-3 h至OD₆₀₀在0.4-0.6之间。

2. 将培养液置于冰上放置30 min，然后于4 ℃下4000 r/min离心10 min，收菌。

3. 按3 mL菌液/1 mL的CaCl₂溶液轻轻悬浮细胞，冰上放置30 min后，4 ℃下4000 r/min离心5 min，弃去上清。

4. 加入700 μL的CaCl₂轻轻悬浮细胞，加入300 μL的甘油混合均匀，即成感受态细胞悬液。

5. 感受态细胞分装成100 μL的小份，贮存于-80 ℃可保存半年。

1. 从-80 ℃超低温冰箱中取出保存于甘油管中的毕赤酵母GS115或X-33，在YPD平板上划线，30 ℃恒温培养箱中培养 3天。

2. 挑取单菌落，接种在5 mL YPD液体培养基中，于28 ℃振荡培养18-24 h。

3. 取80-120 μL过夜培养物，接种到100 mL液体YPD培养基中，过夜生长至OD₆₀₀ ＝1.15-1.5之间（最好是1.3），将细胞置4 ℃或冰上放置10 min。

4. 4 ℃下在2000 g离心5 min，收集细胞。加入100 mL冰冷的无菌水轻轻使菌体悬浮，再按上步离心。

5. 加入50 mL冰冷的无菌水悬浮清洗，两管合并到一管，再按上步离心，弃上清。

6. 细胞悬浮于40 mL 1 M冰冷的山梨醇，依上步离心后，再悬浮于20 mL 1 M冰冷的山梨醇，按上步离心，去上清。

7. 用大约100-200 μL的1 M冰冷的山梨醇重悬细胞，使细胞终浓度达到1×10¹⁰ cells/mL，放置在冰上备用（仅当天使用）（一般先加100 μL重悬，若细胞比较粘稠吸附不起来，再适当加50-100 μL）。

1. 挑取宿主菌接种于3 mL 液体培养基中，37℃摇床培养过夜。

2. 从过夜培养物中取100 µL菌液，接种至用50 mL 离心管配好的5 mL SPI Medium中，37℃摇床培养，3 h后开始测OD₆₀₀，当培养物生长到对数末期时约4.5 h，快速取200 µL接种到2 mL SP II Medium中，于37℃ 100 rpm摇床培养1.5 h。

3. 加20 µL 100×EGTA溶液，于37℃ 100 rpm摇床培养10 min，用1.5 mL离心管分装成500 µL每管。

4. 向管中加入适量的质粒，轻轻混匀于37℃ 100 rpm摇床培养30 min。

5. 将离心管转移到250 rpm摇床，37℃培养1.5 h。

6. 以4000 rpm离心收集菌体，弃部分上清液，留100 µL重悬菌体，涂相应的选择性平板，37℃过夜培养。

1. 挑取宿主菌单菌落至10 mL枯草芽孢杆菌基本培养基中，37℃ 剧烈振荡培养16~18 h，250 r/min，培养至OD₆₀₀为1.0。

2. 取1.5 mL该培养液加入到10 mL 37℃ 水浴预热的40 mL新鲜枯草芽孢杆菌基本培养基中，37℃剧烈振荡培养4 h，250 r/min。

3. 加入 10 mL芽孢杆菌饥饿培养基，37℃剧烈振荡培养4 h，250 r/min。

4. 将细菌在冰水浴冷却15 min，分装于0.5 mL Eppendorf 管中，于4℃ 10000 r/min 离心10 min，用预冷的水轻轻溶解悬浮，可直接进行实验，也可于-80℃冻存。