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提到细胞生物学实验,最基础的恐怕就是seeding cells了吧,把用于实验的细胞铺的均匀且密度适宜,不仅在看起来赏心悦目,更是决定了实验结果的稳定性。

从10cm dish到96孔板,难度逐步增加~ ~ ~ 在这里我以293T细胞为例。




均匀接种通关手册



NO.1


10cm dish



均匀接种

通关秘籍:

1、dish紧贴,紧贴你的实验台;前前后后,左左右右晃起来;

前后前后前后前后左右左右左右

2、10cm dish可以晃得慢一点,想象你的手里dish中不是培养基,而是,海浪!~~~~~~

轻柔且缓慢,10次重复即可。

记得显微镜下观察哦,推荐4x物镜~~~,不满意就再加一个循环,切记请勿用力过猛将液体洒出来哟。




NO.2

6cm dish

均匀接种

通关秘籍:

1、参照10cm dish,速度加1挡;比如说之前你一个前后左右要2s,现在换成1s。

记得显微镜下观察哦,推荐4x物镜~~~,不满意就再加一个循环,切记请勿用力过猛将液体洒出来哟。




NO.3

3.5cm dish/6孔板




均匀接种

通关秘籍:

1、3.5cmdish和6孔板的一个孔在规格上是一样的,可以将前后左右的幅度再大一些,比如6cm dish你的一个前后跨度5cm,现在换成10cm,速度加档相比6cm dish加0.5档。

记得显微镜下观察哦,推荐4x物镜~~~,不满意就再加一个循环,切记请勿用力过猛将液体洒出来哟。




NO.4

12孔板-24孔板


均匀接种

通关秘籍:

1、再剧烈一点,切记请勿用力过猛将液体洒出来哟。




NO.5

48孔板





均匀接种

通关秘籍:

1、一般到48孔板就不推荐上下左右了,不是说这种方法不行,而是不太好操作,得稍微老一点的手。

推荐使用以下两种方法中的一个或联合使用:

方法一

轻拍孔板边缘!加入200-500μL左右细胞悬液,左手或右手水平持板,沿着4条边 依次轻拍数下,不要拘泥于拍顺序和位置,以镜下均匀为准。

方法二

预加培养基,再滴加细胞悬液!若是你想要每孔盛500μL media,你可以先放4/5的media,也就是400μL,再把你要的细胞悬浮成100μL,使用移液枪,垂直于平板缓慢滴加到板中央即可,只要够垂直和居中,一般不需要摇晃或者拍板就可以非常均匀。




NO.6

96孔板


均匀接种

通关秘籍:
1、到96孔不建议摇晃和拍板,不是说不行,难度比较大了。
建议使用48孔板(第5关)的方法二,把各个体积缩小一半,也就是50μL,滴加到200μL中,若是滴不出,也可以使液滴接触培养基平面使两者汇合



接种数目通关手册







接种数目

比6cm dish小的孔板,都可以预先添加一定体积的PBS或培养基湿润孔板,以使其变得亲水。


接种数目以293T细胞为例:


1】10cm:300-500万;相当于10cm dish 80%汇合时1:4或1:5传代的效果;

【2】6cm:120-200万;其底面积为10cm的1/2.5;

【3】3.5cm/6孔板:60-80万;

【4】12孔板:20-30万;

【5】24孔板:10-15万;

【6】48孔板:5-8万;

【7】96孔板:3-5万。

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