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提到细胞生物学实验,最基础的恐怕就是seeding cells了吧,把用于实验的细胞铺的均匀且密度适宜,不仅在看起来赏心悦目,更是决定了实验结果的稳定性。
从10cm dish到96孔板,难度逐步增加~ ~ ~ 在这里我以293T细胞为例。
均匀接种通关手册
NO.1
10cm dish
均匀接种
1、dish紧贴,紧贴你的实验台;前前后后,左左右右晃起来;
前后前后前后前后左右左右左右
2、10cm dish可以晃得慢一点,想象你的手里dish中不是培养基,而是,海浪!~~~~~~
轻柔且缓慢,10次重复即可。
记得显微镜下观察哦,推荐4x物镜~~~,不满意就再加一个循环,切记请勿用力过猛将液体洒出来哟。
NO.2
6cm dish
均匀接种
1、参照10cm dish,速度加1挡;比如说之前你一个前后左右要2s,现在换成1s。
记得显微镜下观察哦,推荐4x物镜~~~,不满意就再加一个循环,切记请勿用力过猛将液体洒出来哟。
NO.3
3.5cm dish/6孔板
均匀接种
1、3.5cmdish和6孔板的一个孔在规格上是一样的,可以将前后左右的幅度再大一些,比如6cm dish你的一个前后跨度5cm,现在换成10cm,速度加档相比6cm dish加0.5档。
记得显微镜下观察哦,推荐4x物镜~~~,不满意就再加一个循环,切记请勿用力过猛将液体洒出来哟。
NO.4
12孔板-24孔板
均匀接种
1、再剧烈一点,切记请勿用力过猛将液体洒出来哟。
NO.5
48孔板
均匀接种
1、一般到48孔板就不推荐上下左右了,不是说这种方法不行,而是不太好操作,得稍微老一点的手。
推荐使用以下两种方法中的一个或联合使用:
方法一
轻拍孔板边缘!加入200-500μL左右细胞悬液,左手或右手水平持板,沿着4条边 依次轻拍数下,不要拘泥于拍顺序和位置,以镜下均匀为准。
方法二
预加培养基,再滴加细胞悬液!若是你想要每孔盛500μL media,你可以先放4/5的media,也就是400μL,再把你要的细胞悬浮成100μL,使用移液枪,垂直于平板缓慢滴加到板中央即可,只要够垂直和居中,一般不需要摇晃或者拍板就可以非常均匀。
NO.6
96孔板
均匀接种
接种数目通关手册
接种数目
【1】10cm:300-500万;相当于10cm dish 80%汇合时1:4或1:5传代的效果;
【2】6cm:120-200万;其底面积为10cm的1/2.5;
【3】3.5cm/6孔板:60-80万;
【4】12孔板:20-30万;
【5】24孔板:10-15万;
【6】48孔板:5-8万;
【7】96孔板:3-5万。