本期我们将为您提供优化 4D-Nucleofector X 单元的 Nucleofection 条件的指南,及有关该主题的常见问题。


Q:Nucleofector I 或 II 条件是否与 4D-Nucleofector X 单元兼容?
4D-Nucleofector 系统基于升级后的 Nucleofector 技术,并具有以下主要改进
· 两种 Nucleofection 体系(20ul和100ul),且实验条件可以互相转移
· Nucleocuvette 由导电聚合物而非铝组成,提高了细胞活力
· 简化的 4D-Nucleofector 试剂
· 更广泛的程序来微调您的优化
由于这些差异,为 Nucleofector I 或 II 设备推荐的解决方案对 4D-Nucleofector 系统无效。然而,在 4D-Nucleofector X 单元上运行优化是一个潜在改善 Nucleofection 结果的绝佳机会。


Q:可以优化哪些参数?
· 在 Nucleofection 优化中,最重要的参数是 Nucleofector 试剂和程序。


Q:我应该使用什么底物进行优化?
· 无论您感兴趣的底物(质粒、siRNA、蛋白质或化合物)如何,我们始终建议使用我们的 pmaxGFP 载体进行优化。使用 pmaxGFP Vector 进行优化消除了许多变量,例如底物制备的性质和质量以及分析时间。


Q:我应该以什么 Nucleofection 体系进行优化?
· 4D-Nucleofector X 单元旨在简化优化步骤。我们建议使用 20 μl Nucleocuvette Strips 进行优化,减少珍贵细胞的消耗。确定最佳条件后,您可以使用相同的方案,通过将细胞数量和底物数量乘以 5 来简单地切换到 100 μl Nucleocuvette。


Q:如何优化 4D-Nucleofector X 单元上的 Nucleofection 条件?
首先我们将访问Lonza 开放的数据库,knowledge.lonza.查找相关程序及方案。
当您的细胞没有推荐的方案时,将适用以下三种情况之一
· 如果没有任何可用的建议,则开始第一轮优化。几种 Nucleofector 试剂(原代细胞的 P1 至 P5 和细胞系的 SE、SF 和 SG)中的每一种都将使用 15 个不同的程序进行测试。
· 遵循基本的 4D-Nucleofector X 单元方案(如果有)。使用少量的程序 (6–7个) 测试一个或两个 Nucleofector 试剂。
· 数据库描述了 4D-Nucleofector X 单元的 Nucleofection 条件和数据。您可以选择测试它们或返回前两个选项之一。


Q:何进一步改善我的 Nucleofection 条件?
一旦从第一轮优化中获得 Nucleofection 的结果,您可以使用我们基于 Web 的优化表格请求我们的反馈,或将您的结果通过电子邮件发送至:
scientific.support@lonza
参考下方的优化策略,可能会改善您的 Nucleofection 结果:
· 在表格中选择效果最好的初始程序(例如 DN-100)。表格中间垂直列出的是第一轮优化中描述的 15 个程序。
· 使用所选程序左侧的程序来提高细胞活力(例如 DH-100)。使用右侧的程序来提高转染效率(例如 ER-100)

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上海优宁维生物科技股份有限公司(简称:优宁维)自2004年成立以来一直专注于抗体及相关产品,是国内专业、全面的抗体供应商和抗体专家,十多年来,已逐渐发展成为生命科学一站式供应商。公司整合了国内外50多家行业知名品牌,提供700多万种以抗体为核心的生命科学试剂、耗材、仪器、软件、定制、实验室服务、供应链服务等,为更多的生命科学科研工作者提供 专业、全面、安全、快捷的产品和服务。
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