Masson三色染色原理及步骤（胶原纤维染色法）
森贝伽生物2018-07-25 12:53
Masson三色染色又称马松染色，是结缔组织染色中最经典的一种方法，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。结缔组织狭义上是指其含有的三种纤维：胶原纤维、网状纤维、弹力纤维，而胶原纤(collagenfiber)是分布最广、含量最多的一种纤维。
染色原理
所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。该法染色原理不阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织；而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。然而，淡绿或苯胺蓝的分子量都很大，因此Masson染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈绿色(淡绿)或蓝色(苯胺蓝)，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。
Masson三色染色特点
染色稳定分化时间短，1～2s色彩清晰鲜艳适用范围广，适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色所染切片保存时间长且不易褪色
Masson三色染色步骤
1、切片常规脱蜡至水，用配制好的Weigert铁苏木素染色5～10min。
2、用酸性乙醇分化液分化，水洗。
3、用Masson蓝化液返蓝，水洗。
4、蒸馏水洗1min。
5、丽春红品红染色液染色5～10min。
6、在上述操作过程中按蒸馏水:弱酸溶液=2:1比例配制弱酸工作液，用弱酸工作液洗1min。
7、磷钼酸溶液洗1～2min。
8、用配制好的弱酸工作液洗1min。
9、直接入苯胺蓝染色液中染色1～2min。
10、用配制好的弱酸工作液洗1min。
11、95%乙醇快速脱水。无水乙醇脱水3次，每次5～10s。
12、二甲苯透明3次，每次1～2min。中性树胶封固。
染色结果：胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色，胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色，胞核呈黑蓝色
注意事项：
1、切片脱蜡应尽量干净。固定起着重要的作用，使用不同的固定液可延或缩短染色时间。
2、取A1、A2等量混合即为Weigert铁苏木素染液，一般24h失去染色力。
3、酸性乙醇分化时间应根据切片厚薄、组织的类别和新旧而定。
4、弱酸溶液可使色彩更清晰鲜艳，如使用量大可自行配制0.1～0.3%乙酸溶液予以替代。
5、磷钼酸分化时要在镜下控制，分化到胶原纤维呈淡红色、纤维呈红色即可。分化时间根据染色深浅而定，一般1～2min。
6、Masson蓝化液亦可自行配制Scott促蓝液或0.1～1%碳酸锂水溶液予以替代。
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